实验室刚完成装修，容器和设备摆放整齐，使用的器具也经过高压灭菌，细胞却出现了细菌污染。问题究竟藏在哪里？

近期，梵通生物接到一位客户的求助，希望调查实验室细胞培养中的细菌污染问题。来到现场，梵通人员看到，实验室刚完成装修，墙面改为彩钢板，并建立了新风系统。操作容器和设备摆放整齐，现场没有明显的杂乱现象。然而，环境整洁只是调查的起点。与细胞直接接触的容器、配件，以及它们的处理和使用过程，同样需要逐一核查。

一  线索出现在已经灭菌的容器内通过与实验室人员交流，梵通将调查重点逐步收敛到相关密闭容器及配件。工作人员介绍：“这些容器和配件都是经过高压灭菌的。”梵通没有因此排除这些物品，而是继续开展采样和检测。随后，梵通实验室在经过高压灭菌处理的容器内检出了细菌，与细胞污染相关细菌的基因测序结果一致。结合现场调查、过程复核和针对性验证，梵通完成了相关污染环节的排查。这次经历提出了一个值得所有实验室关注的问题：我们确认的是“做过高压灭菌”，还是“待处理部位真正达到了灭菌要求”？

二  高压灭菌关键在于蒸汽能否到达实验室常说的“高压灭菌”，通常指压力蒸汽灭菌。压力本身并不等于灭菌效果。待处理物品需要在适宜的蒸汽条件下，达到规定的温度和作用时间。容器和配件如果存在密闭空间、阀门、盲端、狭窄通道或紧密贴合面，就需要特别关注内部空气能否排出、蒸汽能否进入。外部接触到蒸汽，不能直接代表内部每一个位置都达到了同样的处理条件。容器是否需要松盖，配件是否需要拆卸，阀门是否需要打开，应按照器具及灭菌器使用说明确定，并通过适宜的确认方式证明其有效性。

三  从一个细节说起  纸塑袋平放还是侧放除了容器结构，包装和装载方式也会影响灭菌过程。纸塑袋平铺在篮筐里，一层层叠放，看起来整齐，也能装下更多物品。但包装之间的叠压和遮挡，可能影响蒸汽进入、空气排出及后续干燥。对于医院消毒供应中心的压力蒸汽灭菌，WS 310.2—2016《医院消毒供应中心 第2部分：清洗消毒及灭菌技术操作规范》明确要求：纸袋、纸塑包装物品应侧放。侧放时，还要保留间隙。将袋子竖起来后紧紧挤在一起，仍然可能阻碍介质交换。常见纸塑袋的纸面与塑料膜面透气性能不同，具体排列应遵循包装材料、装载架和灭菌器的使用说明，避免透气面被大面积遮挡。这里讨论纸塑袋，是为了说明装载细节的重要性，并不表示本次案例由纸塑袋摆放不当引起。

四  不同物品不能用同一种摆法灭菌装载需要结合物品结构和材质安排。WS 310.2—2016中的相关要求可概括如下。

上述要求用于相应的器械、器皿装载情形，不能据此将装有液体的密闭瓶倒置灭菌。实验室应结合自身物品特点、设备说明和已确认的装载条件，制定具体操作规程。装载数量同样不能只看“柜门能否关上”。物品的重量、密度、包装和排列方式，都应处于适用的负载范围内。

五  程序结束以后还要检查什么灭菌器完成运行后，物品是否干燥、包装是否完整、后续操作是否受控，仍然关系到最终使用状态。按照WS 310.2—2016的相关要求，卸载取出的物品冷却时间应大于30分钟；湿包不应储存与发放，应分析原因并改进。不能将湿包晾干后，直接作为合格无菌包使用。容器在冷却、转运、储存和组装过程中，也应避免接口、内壁及配件再次受到污染。包外化学指示标识变色，只能提供相应的过程信息，不能单独证明复杂容器内部或全部负载均已达到灭菌要求。

六  把已经灭菌落实到每个关键部位这次调查的关键线索，来自一个被认为“已经高压灭菌”的容器。它提醒我们，污染控制需要检查具体过程：清洗是否到位，容器和配件如何组装，包装是否适宜，蒸汽能否到达内部，以及灭菌后如何保存和使用。纸塑袋侧放、包装之间留缝、密闭结构按要求处理——这些看似普通的操作细节，都需要在日常工作中落实。梵通生物通过现场调查、采样检测、基因测序及针对性验证，将污染线索与实际操作联系起来，为客户查找原因、制定整改措施提供依据。本文案例已作匿名化处理。文中引用的医院消毒供应中心装载要求，应结合适用范围使用；实验室具体灭菌操作还应遵循器具、包装及设备说明和经确认的程序。

参考依据WS 310.2—2016《医院消毒供应中心 第2部分：清洗消毒及灭菌技术操作规范》。国家卫生健康委员会公开标准，2017年6月1日起实施。标准公开页面：https://www.nhc.gov.cn/wjw/s9496/201701/bba98c75171446849107254929595984.shtml